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你知道什么是雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)嗎?

 更新時間:2024-01-09    點(diǎn)擊量:947

在基因表達(dá)調(diào)控的研究中,報(bào)告基因廣泛應(yīng)用,如熒光蛋白、真核抗性和熒光素酶等。在一些臨床醫(yī)學(xué)或基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)文章中,雙熒光素酶結(jié)合驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)部分是多數(shù)機(jī)制研究bi備的實(shí)驗(yàn)部分,例如:在通路研究中,尤其涉及到miRNA與功能基因的相互作用時,雙螢光素酶報(bào)告基因檢測實(shí)驗(yàn)是bi備的實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)。那么你知道到底什么是雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)嗎?讓我們一起來看看吧!

螢光素酶(Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物螢光的酶的總稱,其中應(yīng)用較為廣泛的是螢火蟲螢光素酶(Firefly luciferase)和海腎螢光素酶(Renilla luciferase)。

螢火蟲螢光素酶可以催化螢光素氧化成oxyluciferin,在螢光素氧化的過程中,會發(fā)出生物螢光,呈現(xiàn)黃綠色,海腎螢光素酶可以催化腔腸素氧化成coelenteramide,在腔腸素氧化的過程中,會發(fā)出生物螢光,呈現(xiàn)藍(lán)光,通過酶標(biāo)儀即可測定所發(fā)出的生物螢光。

雙螢光素酶報(bào)告基因通常以螢火蟲螢光素酶為報(bào)告基因,以海腎螢光素酶為內(nèi)參基因,如此所構(gòu)成的報(bào)告系統(tǒng)有檢測靈敏度高、動態(tài)范圍廣、內(nèi)參平衡等優(yōu)勢,因此在實(shí)驗(yàn)中得到廣泛應(yīng)用。

圖片1.png


常見應(yīng)用方向:

1. 驗(yàn)證miRNAmRNA靶向互作。將靶mRNA3UTR序列插入報(bào)告基因載體,再共轉(zhuǎn)入該miRNA,檢測螢光素酶活性。

2. 驗(yàn)證miRNAcircRNA靶向互作。將circRNA序列插入報(bào)告基因載體中F-Luc3UTR區(qū)域,檢測螢光素酶活性。

3. 驗(yàn)證miRNAIncRNA靶向互作。將IncRNA序列插入報(bào)告基因載體中F-Luc3UTR區(qū)域,檢測螢光素酶活性。

4. 啟動子活性分析。

將啟動子區(qū)域序列進(jìn)行分段截短,再分別構(gòu)建入報(bào)告基因載體,檢測其啟動子活性。

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