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流式細(xì)胞術(shù)一文Get

 更新時間:2025-01-16    點擊量:130

一、流式細(xì)胞術(shù)

流式細(xì)胞術(shù)(Flow Cytometry,FCM)從字面意義理解,Flow—FluidCyto—Cell、Metry—Measurement,是一種對液流中排成單列的細(xì)胞或其它生物微粒(如微球,細(xì)菌,小型模式生物等)逐個進行快速定量分析和分選的技術(shù)。其特點是通過快速測定庫爾特電阻、熒光、光散射和光吸收來定量測定細(xì)胞DNA含量、細(xì)胞體積、蛋白質(zhì)含量、酶活性、細(xì)胞膜受體和表面抗原等許多重要參數(shù)。根據(jù)這些參數(shù)將不同性質(zhì)的細(xì)胞分開,以獲得供生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究用的純細(xì)胞群體。

1.流式細(xì)胞術(shù)的關(guān)鍵優(yōu)勢:

高通量:一次實驗?zāi)軌蚍治鰯?shù)千至數(shù)百萬個細(xì)胞,幾秒內(nèi)完成大規(guī)模數(shù)據(jù)收集。

單細(xì)胞多參數(shù)分析:一次實驗可同時測量單個細(xì)胞的多個參數(shù),如細(xì)胞大小、顆粒性、表面標(biāo)志物和內(nèi)部復(fù)雜性。

數(shù)據(jù)精確度高:通過熒光信號與細(xì)胞大小等物理參數(shù)結(jié)合,提供精確的亞群分析。

2.核心應(yīng)用

免疫表型分析(Immunophenotyping:通過熒光標(biāo)記的抗體鑒定不同的免疫細(xì)胞亞群。

細(xì)胞周期分析:評估細(xì)胞群體的不同周期階段。

細(xì)胞凋亡檢測:通過標(biāo)記凋亡相關(guān)分子檢測細(xì)胞凋亡情況。

細(xì)胞活力檢測:結(jié)合活細(xì)胞與死細(xì)胞染料,分析細(xì)胞活力狀態(tài)。

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二、流式細(xì)胞術(shù)原理

1. 特定波長的激光束直接照射到高壓驅(qū)動的液流內(nèi)的細(xì)胞,產(chǎn)生的光信號被多個接收器所接收,包括激光束直線方向上接收到的散射光信號(前向角散射)和激光束垂直方向上接收到的光信號(散射光信號(側(cè)向角散射)和熒光信號)。液流中懸浮的直徑從0.2-150 μm的細(xì)胞或顆粒能夠使激光束發(fā)生散射,細(xì)胞上結(jié)合的熒光化合物被激光激發(fā)后能夠發(fā)射熒光。散射光信號和熒光信號被相應(yīng)的接收器接收,根據(jù)接受到的信號的強弱從而反映每個細(xì)胞的物理學(xué)特征。

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2. 熒光的原理 是流式細(xì)胞術(shù)中的核心。熒光分子(稱為熒光團,fluorophore)通過吸收外部光源(如激光)產(chǎn)生激發(fā),隨后回到基態(tài)時發(fā)出熒光。這一發(fā)射光信號可被檢測,并用于標(biāo)記不同的細(xì)胞組分,如細(xì)胞表面或內(nèi)部抗原。

3. 熒光過程的三個階段:

激發(fā)(Excitation):熒光分子吸收激光能量,電子從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)。

激發(fā)態(tài)壽命(Excited Lifetime):熒光分子處于激發(fā)態(tài)的時間極短,通常為納秒級。

發(fā)射(Emission):電子回到基態(tài)時釋放多余的能量,以較低能量的光子形式發(fā)射,波長比激發(fā)光更長。

4. 斯托克斯位移(Stokes Shift):

斯托克斯位移是指激發(fā)光的波長與發(fā)射光波長之間的差異,發(fā)射光總是比激發(fā)光的波長長、能量低。這個位移是區(qū)分不同熒光染料發(fā)射信號的基礎(chǔ)。利用這種位移可以有效避免激發(fā)光與發(fā)射光的混淆。

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5.熒光染料的選擇:

熒光染料是根據(jù)它們的激發(fā)波長和發(fā)射波長來選擇的。常見的熒光染料如Alexa Fluor系列、FITC、PE等,它們有不同的光譜特性,適用于不同的激光器配置。(Alexa Fluor 488 的激發(fā)波長為488 nm,發(fā)射波長為530 nm


三、Biolegend抗體代理——天津益元利康生物科技有限公司,為您提供流式抗體等產(chǎn)品。歡迎咨詢?。。。?!

部分Biolegend產(chǎn)品列表:

品牌貨號商品名稱
Biolegend803002Purified anti-β- Amyloid, 1-16 Antibody (Previously Covance catalog# SIG-39320)
Biolegend139335Brilliant Violet 510™ anti-mouse CD64 (FcyRI)  
Biolegend107628APC/Cyanine7 anti-mousel-A/-E Antibody
Biolegend151210PE anti-mouse/human Ki-67 Antibody
Biolegend103205FITC anti-mouse/human CD45R/B220 Antibody
Biolegend130021APC anti-mouse Tim-4
Biolegend740150LEGENDplex™ Mouse Inflammation Panel (13-plex) with Filter Plate
Biolegend801202Purified anti- Tubulin β 3 (TUBB3)
Biolegend145513Brilliant Violet 605  anti-mouse CD185 (CXCR5)
Biolegend109110PE/Cyanine7 anti-mouse CD279 (PD-1) Antibody
Biolegend480172MojoSort™ Mouse CD146 (LSEC) Selection Kit
Biolegend480017MojoSort  Buffer (5X)


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 5.生物樣本運輸(國內(nèi)、);

二、多家代理品牌,涉及30多種較有名品牌,經(jīng)營代理500多個品牌:

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