歡迎來到天津益元利康生物科技有限公司網(wǎng)站!
022-66387942不知道大家是否會遇到細胞凍存的時候狀態(tài)非常不錯,結果等到需要用到該細胞的時候怎么也復蘇不起來的情況啊?或許可能是凍存細胞的時候出現(xiàn)了什么差錯?
一.細胞凍存的原則:慢凍,細胞在冷凍過程中,如果降溫過快,會形成大的冰晶,這些冰晶會破壞細胞結構,導致細胞死亡。
詳細版本見《細胞凍存的原理是什么?》
二.凍存液的配置:
常用配置比例:培養(yǎng)基:血清:DMSO=7:2:1
適用于大多數(shù)細胞系,能夠保證細胞在凍存過程中有較高的存活率。
血清:DMSO=9:1
適用范圍:適用于需要長時間保存或者具有特別珍貴性的細胞系。血清含量高,可以更好地保護細胞,并確保其在凍存后依然保持較好的生物學特性。
無血清凍存液:適用于某些對血清敏感或需要避免血清成分的細胞系。配置比例:如10% DMSO+90%專用無血清培養(yǎng)基,或其他適合細胞生長的無血清替代品。
凍存注意事項?。?!
詳細版本見《細胞凍存的注意事項》
1.不要將DMSO直接加入含有細胞的培養(yǎng)基中,因為DMSO溶于培養(yǎng)基時會釋放大量熱量,可能燙傷細胞。在加入細胞前,可以將配置好的凍存液放于4℃進行預冷(預冷步驟并非必需)。DMSO在4°C時毒性會大大減弱,且滲透速度加快,有助于保護細胞。
2.若使用凍存盒進行凍存,必須將凍存盒解凍至室溫(避免溫度驟變對細胞的損傷:如果直接將冷凍的凍存盒從低溫環(huán)境取出,并立即打開或處理,細胞會受到溫度驟變的影響。
溫度的急劇上升可能導致細胞內冰晶的形成或擴大,對細胞膜和細胞器造成機械性損傷,進而影響細胞的存活率。)
3.把握細胞凍存的密度:應確保細胞處于對數(shù)生長期,形態(tài)正常,無污染,且細胞密度足夠大,因為凍存和復蘇的過程中不可避免會導致部分細胞死亡。
細胞凍存的步驟:
詳細版本見《細胞凍存的實驗步驟》
1.配置好細胞凍存液,置于4℃預冷備用
2.將待凍存的細胞從培養(yǎng)箱中取出,棄去舊的培養(yǎng)基,PBS洗滌,對于貼壁細胞,加入適量胰酶消化液,將培養(yǎng)皿放入37℃培養(yǎng)箱中消化數(shù)分鐘(消化時間根據(jù)細胞類型而定)當觀察到細胞大塊大塊地從皿底脫落時,加入等體積的wan全培養(yǎng)基終止消化。離心收集細胞;對于懸浮細胞直接離心收集
3.向離心管中加入適量的凍存液,用移液器輕輕吹打細胞沉淀,使細胞均勻懸浮于凍存液中。
4.將重懸后的細胞懸液分裝至無菌凍存管中,凍存管放入-80過夜,次日轉移置液氮保存。
天津益元利康生物科技有限公司:
一、輻射五大服務方向:
1.國內試劑耗材經(jīng)銷代理;
2.國外試劑訂購(直訂,或境外代理);
3.基因組測序(二代,二代+三代);
4.基因分型(SNP檢測):低/中/中 高通量項目;
5.生物樣本運輸(國內、);
二、多家代理品牌,涉及30多種較有名品牌,經(jīng)營代理500多個品牌:
Qiagen、Sigma、R&D、Epigentek、ThermoFisher、DNA Genotek、USA Scientific、Matreya、Sage Science、List Labs、Macrocyclics、Steraloids、NIBSC、mobio、immunodx、cellsystems、medicago、abcam、CST、Roche、Bethyl、sino Biological、clodrosome、adi BIO-WORLD、TOKU-E、HYPHEN BioMed、moltox、ZeptoMetrix、International Humic、biocytex、Toxin Technology 、Streck、Elastin、biomax、Orflo Technologies、Accegen、Advbiomart、genlantis、R&D、Cygnus Technologies LLC、Enzyme Research、Bio/Data Corporation、Greer Lab 、Solarbio、bangslabs、bioline、musechem、Novocastra stemrd、hyphen-biomed、polyplus、moltox 、exiqon、pentapharm、verichemlabs、GenStar、ALZET、lucernatechnologies 、meridian、origene、zimmerpeacocktech、horizondiscovery、Reagents、megazyme、elisasystems………
所有生物試劑耗材都可以進口,特別是冷門品牌,均能給客戶購買到。價格優(yōu),貨期短,可加急,快10天到貨;保證服務質量,所有產品均提供售后服務。大部分客戶我們提供貨到付款服務,
公司自成立依靠過硬的服務和良好的信譽與各大企事業(yè)單位、科研單位建立長期合作??蛻舭ū贝螅迦A,地大,中科院各所,各大藥企等等。
專業(yè)訂購國內外試劑耗材,常備現(xiàn)貨,一手貨源,歡迎合作。
上一篇:小分子蛋白的WB該如何?
下一篇:CCK8實驗注意事項